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DS 系列– TN 168 OD600 測(cè)量性能數(shù)據(jù)示例

更新時(shí)間:2025-06-30      點(diǎn)擊次數(shù):49

對(duì)于 OD600測(cè)量時(shí),穿過(guò)樣品的光被懸浮在樣品中的細(xì)胞向隨機(jī)方向散射。這種光散射是特定細(xì)胞大小和形狀以及細(xì)胞懸液密度的函數(shù)。此外,死細(xì)胞和細(xì)胞碎片可能會(huì)導(dǎo)致光散射。相同密度的不同細(xì)胞類型(例如每毫升細(xì)胞數(shù))可能導(dǎo)致不同的 OD600值。

光學(xué)配置

分光光度計(jì)的光學(xué)配置在特定儀器檢測(cè)到的光散射中起著重要作用。不同的 OD600當(dāng)在具有不同光學(xué)設(shè)置的分光光度計(jì)上測(cè)量時(shí),將報(bào)告相同細(xì)菌培養(yǎng)物的值。一個(gè) OD600的 0.8 可以在另一臺(tái)儀器上報(bào)告為 0.5,而不會(huì)在任何一臺(tái)設(shè)備上出現(xiàn)錯(cuò)誤。

換算系數(shù)

DeNovix DS-11 系列分光光度計(jì)/熒光計(jì)可使用 1 μL 微量模式(適合高密度培養(yǎng)物)或各種光程比色皿模式測(cè)量微生物培養(yǎng)物。

 

經(jīng)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)值

許多研究人員依賴靶標(biāo) OD600在收獲微生物細(xì)胞培養(yǎng)物或確定接種用于蛋白質(zhì)表達(dá)研究的培養(yǎng)物的正確密度時(shí)從文獻(xiàn)來(lái)源獲得的值。遺憾的是,這些目標(biāo)值可能不適合細(xì)胞類型和所用儀器的組合。建議將 OD600使用與 OD 相關(guān)的生長(zhǎng)曲線根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定值600使用新分光光度計(jì)時(shí)每種細(xì)胞類型的板計(jì)數(shù)值。

DS-11 微量模式可實(shí)現(xiàn)更高的 OD600值使用其獲得特別的自動(dòng)路徑長(zhǎng)度調(diào)整。請(qǐng)記住,微量和比色皿模式使用不同的光學(xué)配置,因此在比較使用兩種模式測(cè)量的值時(shí),建立轉(zhuǎn)換因子可能很有用。

最好使用接近所需目標(biāo) OD 的測(cè)量值來(lái)確定因子600價(jià)值。酌情考慮稀釋。

可以確定一個(gè)等效因子,然后將其應(yīng)用于使用不同分光光度計(jì)進(jìn)行的測(cè)量。

示例數(shù)據(jù)

下面的數(shù)據(jù)是一個(gè)例子,說(shuō)明了在不同分光光度計(jì)上測(cè)量相同的光散射樣品如何導(dǎo)致不同的 OD600 測(cè)量值(表 1 和表 2)。

將 Formazin 4000NTU 濁度標(biāo)準(zhǔn)品 (Hach cat #246149) 稀釋 7.7 倍以產(chǎn)生初始儲(chǔ)備液。然后在水中進(jìn)行一系列 2 倍連續(xù)稀釋。使用一次性比色皿和 2 mL 的相應(yīng)稀釋度測(cè)量每種溶液,一式三份。未對(duì) 600 nm 測(cè)量值進(jìn)行基線校正。



Table 1: Mean OD600 Values; n=3

SampleAgilent 8453DS-11+
Stock1.15880.8376
Stock 1:20.56960.4245
Stock 1:40.27940.2173
Stock 1:80.13720.1125
Stock 1:160.06840.0594
Stock 1:320.03260.0310
Stock 1:640.01400.0158

Table 2: Precision of Replicate Measurements; n=3

SampleAgilent 8453
% CV
DS-11+
% CV
Stock0.61%0.24%
Stock 1:20.82%1.15%
Stock 1:41.61%2.76%
Stock 1:80.63%1.92%
Stock 1:160.91%3.82%
Stock 1:325.03%8.58%
Stock 1:6411.17%10.82%



線性范圍

基于比色皿的儀器通常具有測(cè)得光程的外徑上限約為 1.5。外徑600如此高的值可能不足以覆蓋培養(yǎng)物的整個(gè)生長(zhǎng)周期,并且在生長(zhǎng)方面可能不是線性的。死亡期的培養(yǎng)物可能表現(xiàn)出不同的光散射行為,這可能會(huì)影響活細(xì)胞密度與測(cè)得的 OD 之間的相關(guān)性600值。

因此,必須仔細(xì)稀釋培養(yǎng)物,以便繪制整個(gè)生長(zhǎng)曲線或確定測(cè)量值不再與活細(xì)胞密度線性相關(guān)的極限。

此外,盡管測(cè)得的 OD600值和特定像元密度在兩種不同儀器上的范圍可能重疊,線性線的斜率可能不同。表 1 中的數(shù)據(jù)如下圖所示(圖 1)作為此范式的一個(gè)例子。

當(dāng)使用轉(zhuǎn)換因子將數(shù)據(jù)從一臺(tái)儀器關(guān)聯(lián)到另一臺(tái)儀器時(shí),可能需要對(duì)特定的 OD 范圍使用不同的因子來(lái)補(bǔ)償不同的斜率。

注意:盡管斜率不同,但兩種儀器的 R2 值均> 0.9999。

圖 1:福爾馬肼標(biāo)準(zhǔn)品與測(cè)得的 OD600 值之間的線性關(guān)系。

OD 600 值和細(xì)胞數(shù)

The OD600應(yīng)用程序允許用戶輸入一個(gè)細(xì)胞數(shù)因子,該因子將乘以測(cè)得的 OD600值來(lái)計(jì)算近似的細(xì)胞/mL 濃度。如前所述,OD600值取決于被采樣溶液中細(xì)胞的大小和形狀以及細(xì)胞密度。一個(gè) OD600值 1 可能等于大約 1 x108一種細(xì)胞類型的細(xì)胞,但僅等于 0.5 x108細(xì)胞。

要使用此功能,建議最初為每種細(xì)胞類型確定適當(dāng)?shù)募?xì)胞數(shù)轉(zhuǎn)換因子。構(gòu)建 OD 的校準(zhǔn)曲線600值與瓊脂平板上生長(zhǎng)的菌落形成單位的細(xì)胞數(shù)量相關(guān)。確保在適當(dāng)時(shí)乘以稀釋因子。

酵母細(xì)胞通常比細(xì)菌細(xì)胞大。因此,OD600值 1 通常相當(dāng)于酵母細(xì)胞比細(xì)菌細(xì)胞少。

最佳實(shí)踐

為確保最佳結(jié)果,以 OD 為目標(biāo)600對(duì)于微量和比色皿模式,應(yīng)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定每種細(xì)胞類型的值。

比色皿模式(推薦)

  • 確保培養(yǎng)物充分混合,并且在從懸浮液中取出等分試樣之前,細(xì)胞尚未沉淀。

  • 確保預(yù)期的細(xì)胞密度在所選 DS-11 + 比色皿模式的線性范圍內(nèi)。

  • 使用高質(zhì)量的塑料比色皿或 Z 高度為 8.5 mm 的石英比色皿。

  • 每次樣品測(cè)量使用干凈的比色皿。根據(jù)制造商推薦的方案清潔比色皿。

  • 確保比色皿以正確的方向插入。

微量模式

  • 在進(jìn)行空白測(cè)量之前清潔兩個(gè)樣品測(cè)量表面。

  • 確保培養(yǎng)物充分混合,并且在從懸浮液中取出等分試樣之前細(xì)胞尚未沉淀。

  • 確保預(yù)期細(xì)胞密度在所選 DS-11 / DS-11 + 微量模式的線性范圍內(nèi)。請(qǐng)記住,盡管微量模式可以測(cè)量具有非常高 OD 值的樣品,但培養(yǎng)物本身可能不會(huì)表現(xiàn)出對(duì)高細(xì)胞密度的線性響應(yīng)。

  • 確保每次測(cè)量時(shí)將完整的 1 μL 樣品輸送到樣品表面。

  • 每次測(cè)量使用新鮮的等分試樣。

  • 使用新鮮的吸頭將每個(gè)樣品等分試樣提供。

  • 將樣品移液到測(cè)量表面時(shí)避免引入氣泡。

  • 每次測(cè)量后,立即使用干燥的實(shí)驗(yàn)室抹布從頂部和底部表面去除樣品。

不同波長(zhǎng)的 OD

Formula Methods 應(yīng)用程序支持創(chuàng)建自定義方法和公式,包括用于測(cè)量 600 nm 以外波長(zhǎng)下 OD 的方法和公式。例如,可以使用以下參數(shù)測(cè)量 650 nm 處的 OD:分析 nm = 650,基線 nm = 留空,最小 nm = 550,最大 nm = 700。

DeNovix DS-11 系列儀器能夠使用預(yù)配置的 OD 測(cè)量酵母和微生物培養(yǎng)物600應(yīng)用程序。

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